聚丙烯酰胺單體和甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)劑在催化劑(如過硫酸銨)作用下形成的凝膠。凝膠孔徑大小可以通過制備時(shí)所使用的濃度和交聯(lián)度控制。交聯(lián)劑越多,孔隙越小。濃度越大,凝膠孔徑越小。
聚丙烯酰胺如何調(diào)節(jié)凝膠的孔徑
由于凝膠層析的分離原理是分子篩作用,它不象其它層析分離方式主要依賴于溶劑強(qiáng)度和選擇性的改變來進(jìn)行分離,在凝膠層析中流動(dòng)相只是起運(yùn)載工具的作用,一般不依賴于流動(dòng)相性質(zhì)和組成的改變來提高分辨率,改變洗脫液的主要目的是為了消除組分與固定相的吸附等相互作用。
聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠為載體的一種區(qū)帶電泳。該凝膠由丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑N,N—甲叉雙丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。聚丙烯酰胺凝膠電泳利用電泳和分子篩的雙重作用分離物質(zhì)。 Acr和Bis單獨(dú)存在或混合在一起時(shí)是穩(wěn)定的,但在具有自由基團(tuán)體系時(shí)就能聚合。引發(fā)自由基團(tuán)的方法有化學(xué)法和光化學(xué)法兩種。
化學(xué)法的引發(fā)劑是過硫酸胺(Ap),催化劑是四甲基乙二胺(TEMED);光化學(xué)法是以光敏感物核黃素來代替過硫酸胺,在紫外光照射下引發(fā)自由基團(tuán)。
采用不同濃度的Acr、Bis 、A p、TEMED使之聚合,產(chǎn)生不同孔徑的凝膠。因此可按分離物質(zhì)的大小,形狀來選擇凝膠濃度。